Los métodos de inoculación y también incubación asi como de toma de datos son los mismos descritos en la sección Efecto de la temperatura en la virulencia de los aislamientos elegidos hacia larvas de Phyllophaga spp. Empleando exactamente los mismos aislamientos de la sección 3.7., se evaluara el efecto de la temperatura en la virulencia de los aislamientos hacia larvas de Phyllophaga spp. Para este experimento se tienen ahora las incubadoras listas a las temperaturas seleccionadas que son de 15, 25 y 30 C. Para este experimento, aparte de las larvas, se requiere de diferentes tipos de suelo para los ensayos.
Después de ello, se deberá emplear insecticidas granulados en el suelo, ya que atacan a las raíces. Hay múltiples maneras de tratar a las plantas perjudicadas por esta plaga. Las larvas se desarrollan a una hondura de diez a 15 cm y pasan por tres instares, cuya duración en promedio es mayor a 9 meses, lo cual es dependiente de las condiciones del medio y la clase.
Según la OMS los plaguicidas también son potencialmente tóxicos para los humanos. Tienen la posibilidad de tener efectos perjudiciales para la salud, por poner un ejemplo, provocar cáncer o acarrear secuelas para los sistemas reproductivo, inmunitario o nervioso. Antes de que se autorice su uso, los plaguicidas deben estudiarse a fin de saber todos sus probables efectos para la salud. Sembrar las semillas de rábano colorado contribuye a repeler este verme ciego. El motivo es porque al instante de germinar, la semilla de esta planta expulsa un gas que deteriora la piel de la larva, ayudando a otros insectos a que logren combatir o eliminar la plaga de la gallina ciega. Este extracto controlará aparte de la plaga de la gallina ciega, otras como vermes, caracoles, pulgones, larvas y hongos.
Bastante antes que se inventaran los pesticidas químicos, los labradores tenían remedios naturales para deshacerse de las invasiones de insectos que afectan las plantas. Estas alternativas naturales a los pesticidas químicos se tienen la posibilidad de fabricar de manera fácil en el hogar y tienen la posibilidad de socorrer la cosecha de nuestro huerto. Se fumiga el suelo previamente mojándolo bien como si echáramos herbicida. La bacteria del bacillus entra en contacto con el suelo húmedo y a los tres días la gallina ciega coge una patología que se llama lechosa. También vale contra el gusano cabezudo del cerezo y no afecta la lombriz roja californiana. Afectan a casi todos los cultivos como pueden ser árboles frutales, hortalizas e incluso a granos como el maíz, arroz, sorgo, frijol, trigo…sobretodo cuando están comenzando a brotar.
Basándose en las especificaciones de los distintos géneros de hongos entomopatógenos descritos por Humber , se determinaron a género todos los aislamientos. Finalmente, se elaboraron preparaciones semi-permanentes colocando 10 μl de una suspensión de 1 X diez 8 conidios/ml de los distintos aislamientos sobre un portaobjetos, se cubrieron con un cubre objetos y fueron selladas con barniz de uñas. Las muestras fueron observadas con el objetivo de 40X en un fotomicroscopio III Carl Zeiss conectado a una cámara digital para microscopio PaxCam. Se extrajo el DNA de todos los aislamientos a través de el kit para extracción de DNA siguiendo las instrucciones del desarrollador. Se amplifico la zona ITS de cada uno de los aislamientos a través de los primers universales ITS5 y 4 (White et al., 1990). Más tarde los modelos de PCR se limpiaron mediante el kit de limpieza de QIAquik PCR Purification Kit siguiendo las normas del desarrollador, al final, todos y cada uno de los productos de PCR limpios se mando a la compañía MAGROGEN en Korea para su secuenciación.
Pero en el huerto sobre todo si hay cantidad considerable de ellas o es realmente una plaga. Puede ser un problema para las raíces de nuestros cultivos. Las larvas que encontramos en el lombricompost o compost no son perjudiciales, sino lo contrario. Estos gusanos de gallina ciega nos asisten a desarticular mucho más la materia orgánica, para que las lombrices la digieran más fácilmente.
Hay que hervir esta planta con agua a lo largo de unos diez minutos, colar la mezcla y echarlo en el huerto o jardín con la ayuda de un spray. Las cáscaras pueden ser un buen fertilizante para la tierra y además de esto un repelente para caracoles y algunas orugas. Se machacan las cáscaras y se salpica el polvo en la base de las plantas.
Siguiendo la misma metodología reportada en la sección previo se evaluó la virulencia de estos aislamientos hacia larvas de Phyllophaga spp. Todo el ensayo se incubo durante 35 días a 25 C en total oscuridad. Se siguió la misma metodología descrita en la sección 3.5. Se inocularon larvas de Phyllophaga spp y Anomala spp. Para cotejar susceptibilidad relativa hacia los aislamientos elegidos.
Para ello, en una caja Petri de 90 mm de diámetro conteniendo 15 ml de agar-agua al 1.5% estéril, se coloco un portaobjetos estéril arriba de cual, uno en cada radical, se pusieron 2 circulo de ADS de 1 cm de diámetro. En todos y cada círculo y con el apoyo de un asa bacteriológica se inoculo conidios de cada aislamiento. Por último se coloco sobre cada círculo de ADS inoculado, un cubreobjetos estéril y se incubo a 25 ºC a lo largo de 7 días o hasta observar esporulación del hongo inoculado en el círculo. Una vez terminado el período de incubación, los cubreobjetos fueron retirados con mucho cuidado del círculo de ADS y puestos sobre una gota de azul de algodón y lactofenol contenido en un portaobjetos. Estas preparaciones se sellaron con barniz de uñas y se examinaron bajo el microscopio compuesto en el objetivo de 40X.
